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在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA被切割，出现单链或双链缺口，并产生与DNA断点数目相同的3’-OH末端。末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）可以将地高辛标记的dUTP（DIG-dUTP）标记至3’-OH末端，DIG-dUTP结合在DNA断点部位，可以通过生物标记的抗地高辛抗体（Anti-DIG-Biotin）反应后，再结合链酶亲和素-荧光素Cy3(SABC-Cy3)。Cy3在554nm激化，在568～574nm发射荧光，呈鲜红色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。

组分	规格
标记缓冲液	3mL
20×TdT	50μL
20×DIG-dUTP	50μL
封闭液	10mL
100×生物素化抗地高辛抗体	50μL
100×SABC-Cy3	50μL
200×Proteinase K	125μL
SABC稀释液	10mL

保存：-20℃，有效期一年。

• 多聚赖氨酸或APES。
  
• 0.01M TBS，PH7.5(配法：1L双蒸馏水中加入8.5克氯化钠，1.2克Tris和0.45～0.5mL纯乙酸)。
  
• 水溶性封片剂或抗荧光衰减封片剂。

• 试剂盒严格-20℃存放。
  
• 初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心5分钟，使试剂沉至管底。
  
• 检测过程中切勿使样品干涸。

• 样品处理：
  
  • 玻片预先用多聚赖氨酸或APES进行处理。
    
  • 细胞涂片和冰冻切片：最重要的是及时固定。用4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0～7.6)室温下固定30～60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤2分钟×2次。
    
  • 组织：有条件时应及时固定。常规4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0～7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定4小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水（脱蜡务必干净）。
• 标本片加0.01M TBS 1:200新鲜稀释Proteinase K 37℃消化1～15分钟，0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化10～60秒钟。新鲜石蜡切片消化5～10分钟。陈旧石蜡切片消化10～15分钟。)
  
• 标本片加标记缓冲液20μL/片，以保持切片湿润。按每张切片取20×TdT和20×DIG-dUTP各1μL，加入18μL标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加标记液，20μL/片。置样品于湿盒中，37℃标记2小时。
  
• 0.01M TBS洗2分钟×3次。
  
• 加封闭液50μL/片，室温30分钟，甩掉封闭液，不洗。
  
• 用SABC稀释液稀释100×生物素化抗地高辛抗体至1×。取1mL SABC稀释液加100×生物素化抗地高辛抗体10μL，混匀后50μL/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应30分钟。0.01M TBS洗2分钟×3次。
  
• 用SABC稀释液稀释100×SABC-Cy3至1×。取1mL SABC稀释液加100×SABC-Cy3 10μL，混匀后50μL/片加至切片。37℃反应30分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
  
• 必要时可用DAPI染色液（货号：ZN1969）轻度复染，蒸馏水洗。抗荧光衰减封片剂封片(可用甘油代替)。荧光显微镜观察。
  
• 结果判定：
  细胞核中有鲜红色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。

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